Оценка антиоксидантной активности Флараксина на начальных этапах свободно-радикального окисления
Журнал: Сборник научных работ 2й Международной Научно-Практической Конференции «Альянс наук: ученый-ученому», 3-7 октября, Т.3, стр.16-18.
А.В.Артемов, В.В.Россихин – докт.мед.наук, Ю.А.Илюхин, П.Г.Осипов
Одеський институт офтальмологи им.проф.Филатова*, Украин;. Харьковская медицинская академія последипломного образования**, Украина; Белгородская областная клиническая больница***, Россия
Флараксин является биофлавоноидным комплексом на основе галловой кислоты (танин) и йодистого калия. Одним из механизмов такого действия, как показали наши предыдущие исследования, является влияние на тиолдисульфидные связи протеинов. Происходящее при этом изменение белкового редокс-потенциала, сопровождается конформационными изменениями белков, и в частности, связанных с процессами иммуногенеза и онкогенеза.
Итогом этих изменений, как показали клинические наблюдения, является повышение цитотоксической активности клеток иммунной системы и активация апоптоза опухолевых клеток.
Кроме этого, известно, что биофлавоноиды обладают антиоксидантным свойством. Однако антиоксидантная активность Флараксина специально не изучалась.
Механизм свободно-радикального окисления и связанная с ним антиоксидантная система рассматриваются как важнейшее патогенетическое звено многих патологических процессов. От этого механизма в значительной степени зависит структурно-функциональная целостность клеток и тканей организма, что напрямую сопряжено с процессами старения и опухолевой трансформации.
Свободно-радикальное окисление обусловлено активными формами кислорода, образующимися в результате ферментативной деятельности оксидоредуктазы. При этом образуются ионы кислорода и перекись водорода (Н2О2).
Определенную роль в этом процессе играет аутоокисление катехоламинов. Механизм повреждающего действия реализуется через взаимодействие ионов кислорода и перекиси водорода с образованием гидроксильных радикалов и свободного кислорода. Это приводит к инактивации различных белков, деструктивным изменениям полисахаридов и стимуляции мутагенеза за счет повреждения ДНК.
Активные формы кислорода инициируют перекисное окисление жирных кислот и их дериватов, что приводит к образованию карбонильных соединений, связывающихся с нуклеиновыми кислотами и белками. Как видно, антиоксидантная защита может стать важным фактором на пути мутагенных изменений, ведущих к образованию неопластических клеток и опухолевой прогрессии.
С целью воздействия на свободно-радикальное окисление в последнее время стали применять антиоксиданты в лечении ишемически заболеваний различной локализации. Широкое применение нашли такие вещества с антиоксидантной активностью, как альфа-токоферол, дибунол, оксипиридины.
Однако многие известные антиоксиданты имеют серьезные недостатки: они действуют лишь на конечном этапе свободно-радикального окисления, а при разложении свободных радикалов полиненасьпценных жирных кислот образуют токсичные продукты.
Клиническая апробация «Флараксина» показала наличие у него противоопухолевых, антивирусных и иммуномодулирующих свойств.
Представляет интерес оценка антиоксидантной активности препарата «Флараксин», учитывая что свободно-радикальное окисление играет важную роль в онкогенезе. Надо также отметить, что изучение свободно-радикальных повреждений и разработка антиокидантной защиты в процессе химиотерапевтического лечения онкологических больных уже привлекло внимание онкологов. Мы полагаем, что роль антиоксидантов не менее важна также для профилактики ранних и поздних рецидивов, т.е. как лекарственных средств сопровождения адъювантной и неадъювантной терапии.
В данной работе нами использован усовершенствованный метод оценки антиокислительной активности антиоксидантов на начальных этапах свободно-радикального окисления по ингибированию супероксид-радикала в реакции аутоокисления адреналина в адренохром в щелочной среде.
Материал и методы
В кювету 10мл спектрофотометра СФ-26 вносили 2,0мл 0,15М натрий-карбонатного буфера с добавлением 3х10-4мл ЭДТА (рН 10), затем прибавляли растворы исследуемых препаратов. Реакцию начинали прибавлением 0,4мл 2,25х10-3М водного раствора адреналина. Исходный кристаллический адреналин растворяли в дистиллированной воде и доводили разбавленной хлороводородной кислотой до рН 2,25. Сначала определяли показатель экстинкции (Е1), отражающий скорость ингибирования аутоокисления адреналина, а затем показатель экстинкции (Е2), отражающий скорость аутоокисления адреналина в присутствии исследуемых препаратов. Реакцию проводили при температуре 35-36°С, в спектрофотометре СФ-26 при длине волны - 480нм, время экстинкции – 3 мин. Антиокислительную активность исследуемых препаратов выражали в процентах ингибирования аутоокисления адреналина и вычисляли по формуле:
(E1-E2)/E1x100
Результаты и обсуждение
В данной работе для оценки антиоксидантной активности по ингибированию супероксид-радикала в реакции аутоокисления адреналина в адренохром нами использован препарат «Флараксин».
В качестве препаратов сравнения взят известный препарат антиоксидантного действия альфа-токоферол и диметилсульфоксид, являющийся одним из наиболее сильных реактиваторов супероксидазы, а также два хелатных соединения ртути: с цистеином (Меркурид Ц) и с метионином (Меркурид М).
Результаты исследования представлены в табл.
Препарат | Концентрация, Мкмоль/мл |
Оптическая плотность*, λ=480нм |
Антиокислительная активность, % |
---|---|---|---|
Флараксин | - | 0,018±0,01 | 85,7 |
Меркурид-Ц | - | 0,07±0,01 | 8,8 |
Меркурид-М | - | 0,07±0,01 | 7,8 |
Альфа-токоферол | 2,5 | 0,018±0,01 | 5,3 |
Диметилсульфоксид | 2,5 | 0,07±0,01 | 43,9 |
Контроль | - | 0,019±0,02 | - |
Примечание. Различие достоверно по сравнению с контролем, р<0,001.
Анализ представленных данных позволяет говорить о наличии выраженной антиоксидантной активности у препарата «Флараксин». Причем эта активность значительно выше, чем у известного антиоксиданта альфа-токоферола и реактиватора супероксидцисмутазы диметилсульфоксида.
Список литературы
- Бойцова Л.В. Изменения антиоксидантной системы глутатиона как показатель цитотоксического действия платидиама.
- Дунаева В.В. , Беленичев И.Ф., Коваленко С.И. и др. Антирадикальная и интиокислительная активность производных 1, 2, 4 – триазола и хиназолина при ишемии головного мозга//Укр. биохим.журн. – 1996.т.68.-№1.С.100-103.
- Зайцев В.Г., Закревский В.И. Защита клеток от экзогенных активных форм кислорода: методические подходы к изучению //Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии. Труды научной конференции, посвященной 100- летию кафедры биохимии. Санкт-Петербургского медицинского университета им.акад. И.П. Павлова. СПб.. 15-17октября 1998. – Т.2.-С.401-405.
- Коровина Н.А., Захарова И.Н., Обыночная Е.Г. Применение антиоксидантов в педиатрической практике// Consilium medicum. – 2003.-Т.5-№9.